Science Advance|蘭大焦作義團隊聯合蘭州華幟天成發現彌散性胃癌免疫治療新策略

2022年5月25日的國際著名期刊《Science Advance》雜志上發表了《New therapeutic strategies targeting uPAR potentiate anti–PD-1 efficacy in diffuse-type gastric cancer》論文，該研究為彌散性胃癌的免疫聯合治療提供了全新的思路。該研究由蘭州大學第二醫學院的焦作義、楊靖及蘭州華幟天成生物科技的王琦深入合作完成。蘭州大學第二醫院秦龍、王龍、張俊昶、周輝年博士研究生為該文共同第一作者。在該論文中，蘭州華幟天成生物科技公司研發團隊承擔了該文章中針對uPAR靶點的功能性單克隆抗體的篩選和制備、課題的整體實驗設計、體內外實驗和結果分析，并有幸成為共通訊作者單位。

在該研究中，通過對彌散性胃癌的蛋白質譜數據以及TCGA免疫相關基因的數據分析， uPAR蛋白（urokinase-type plasminogen activator receptor, 尿激酶型纖溶酶原激活物受體）被發現是潛在的免疫治療靶點。在200多例彌散性胃癌中，組織免疫染色發現uPAR陽性率達18.3%，而正常組織中uPAR表達很低或基本檢測不到。通過大量臨床隨訪數據發現，uPAR在彌散性胃癌組織中高表達和不良臨床預后成顯著相關性。在多株人的胃癌細胞株中，也發現uPAR高表達。根據之前研究，uPAR是尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator，uPA)的受體，其纖溶酶原激活系統可以調控細胞外基質的降解（ECM），也可以與整合素結合激活相關細胞胞內信號，從而影響細胞遷移、黏附、增殖及存活，參與腫瘤侵襲過程。 因此，該研究將uPAR作為一個潛在的免疫治療靶點進行了深入的研究。（圖示一）

依托華幟天成生物科技研發的基于微流控的單細胞抗體技術(MBTA),以及獨特的細胞免疫方法, 華幟天成研發團隊在短短2個月內，通過對1x10⁷個小鼠B細胞抗體進行高效率的分析，拿到了13株高親和力的單克隆抗體，在13株高親和力抗體中，其中有一株單克隆抗體（Clone E2）經過鑒定具備高親和力（Kd=1.95nM，抗原結合解離常數）和特定的生物學功能。（圖示二）

該研究發現uPAR抗體E2可以特定地結合到uPAR蛋白的跨結構域區域（DII-DIII），可以部分阻斷配體pro-uPA，改變下游的ERK激酶的磷酸化，從而抑制了胃癌細胞的從而影響細胞遷移、黏附和增殖。該功能性抗體E2對胃癌細胞的作用表型和uPAR敲除的胃癌細胞表型比較一致。（圖示三）

由于該抗體E2顯示可以對人的胃癌細胞株的遷移、黏附和增殖產生直接影響，該研究同時驗證和評估了抗體的體內功能。通過在免疫缺陷的小鼠（NSG）重建人的免疫系統，以及皮下接種皮下接種MKN-45-uPAR-T2A-Luc胃癌細胞系（CDX模型， cell derived xenograft）或源自DGC病人的腫瘤組織（PDX模型，patient derived xenograft）， uPAR抗體E2可以很好的抑制小鼠CDX胃癌和PDX胃癌的生長，延長了荷瘤小鼠生存時間。值得一提的是uPAR抗體E2 聯合PD-1抗體（anti-PD-1）治療可以進一步抑制胃癌細胞生長。從機制上來說，uPAR抗體可以改變腫瘤微環境和促進T細胞的侵潤。該研究發現， uPAR抗體治療后腫瘤本身可產生T細胞相關趨化因子（CCL3、CCL4、CXCL9和CXCL10），進而促進腫瘤中CD8+ T細胞的浸潤。此外，基于該抗體序列制備的uPAR CAR-T細胞，在胃癌細胞系、類器官和PDX模型中也取得了較好的治療效果。（圖示四）

因此，該研究發現了uPAR功能性抗體E2可以通過多種作用機制，抑制癌細胞生長。直接作用是uPAR抗體可以直接阻斷uPA-uPAR配體受體作用，改變胃癌細胞本身的遷移、黏附和增殖，此外，uPAR抗體可以直接改變胃癌細胞uPAR胞內信號，促進趨化因子CCL3、CCL4、CXCL9和CXCL10，從而促進T細胞浸潤。因此uPAR抗體和PD-1抗體（anti-PD-1）具備較好的協同治療效果。間接作用是uPAR抗體在體內可以通過抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）和補體依賴的細胞毒性作用（complement dependent cytotoxicity, CDC）效應對腫瘤進行直接殺傷。這些作用機制，揭示了uPAR可能是一個潛在的腫瘤免疫治療靶點，uPAR抗體可以很好的協同anti-PD-1腫瘤免疫的治療，為彌散性胃癌的臨床免疫聯合治療提供了新的思路。（圖示五）

目前該研究已申報兩項國內發明專利和兩項PCT國際專利，專利所有權為蘭州大學和蘭州華幟天成共同所有。該研究為胃癌等實體瘤的新藥研發提供了新思路，具有良好的臨床轉化應用前景和社會價值。

原文鏈接：

Therapeutic strategies targeting uPAR potentiate anti–PD-1 efficacy in diffuse-type gastric cancer

蘭州華幟天成生物科技有限責任公司成立于2018年，一家由留學歸國人員創辦的生命科學領域高新技術企業，首創具有國際先進水平的新一代單克隆抗體研發平臺MBAT（Microfluid-Based Antibody Technology）技術，可以一次性篩選到覆蓋一個抗原幾乎所有有效表位的高親和力單克隆抗體。通過此平臺技術，我公司在新靶點創新藥方面取得了一定的成績，與此同時通過此技術開發媲美進口的高質量科研用抗體，助力生命科學研究！歡迎醫院科研院所單位聯系合作。