CRISPR基因敲除-基因編輯服務

CRISPR是一種來源于細菌免疫系統的基因編輯技術，能精確識別靶細胞DNA片段中靶點的核苷酸序列，利用核酸內切酶蛋白對DNA靶點序列進行切割，產生雙鏈DNA斷裂，斷裂將在體內被細胞修復機制修復，其中，非同源末端連接NHEJ這種修復將產生短的核酸插入或刪除，其帶來的基因移碼突變或導致提前出現終止密碼子，從而完成對靶細胞DNA目的基因片段的敲除。在PAM片段上游設計sgRNA后，通過構建基因敲除載體，結合慢病毒系統，可以實現外源基因的整合，利用抗生素或熒光最終篩選出成功實現基因敲除的細胞。

      服務優勢

• 優化升級的CRISPR/Cas9系統，廣泛適用于哺乳動物細胞，脫靶率更低

• 具備豐富細胞培養經驗

• 更低的項目價格，細胞低至9800元/株

      服務內容

• 項目評估

• 細胞抗生素敏感濃度摸索與單克隆形成驗證

• sgRNA設計與敲除載體構建

• 慢病毒包裝與轉染

• 陽性多克隆篩選

• 陽性單克隆篩選

• 敲除驗證

      客戶提供

• 靶細胞及其培養方案、基因名稱

      交付標準

• 1x基因敲除陽性單克隆細胞株(復蘇/凍存)

• 1x項目結題報告

      服務保證

• 項目啟動后，密切跟進實驗進展，每兩周進行一次項目進度匯報

• 項目結題報告包含sgRNA序列、實驗詳細記錄、測序結果及分析等，滿足客戶后期論證材料需求

• 基因敲除陽性單克隆均經過靶標片段T載體克隆測序驗證，保證基因敲除效果

      服務流程

      CRISPR基因敲除案例

1. EGFR基因敲除細胞株的構建

   
   

2. P53基因敲除細胞株的構建

   
   

• 支原體檢測：染色和PCR方法鑒定，確保得到的單克隆細胞株干凈無污染